Conceptos Fundamentales de Asepsia y Desinfección

A continuación, se definen los términos clave relacionados con la higiene y el control microbiológico en entornos de laboratorio:

• Contaminación: Presencia de microorganismos patógenos.
• Infección: Colonización de cualquier germen patógeno en el organismo, a consecuencia del cual puede aparecer una enfermedad.
• Asepsia: Ausencia de microorganismos patógenos, de contaminación o suciedad.
• Antisepsia: Técnica utilizada para combatir la suciedad, como el empleo de sustancias químicas para inhibir o reducir el número de microorganismos.
• Esterilidad: Ausencia de cualquier forma de vida, incluyendo las esporas.
• Esporas: Formas celulares de bacterias y hongos que les permiten vivir en circunstancias precarias. Se hallan en un estado de vida latente sin ninguna actividad metabólica, y con un incremento de la resistencia a temperaturas extremas y a los agentes químicos.
• Germicida: Término que define de forma general a todo agente capaz de destruir microorganismos en tejidos vivos y objetos inanimados. Según el germen sobre el que actúe se denomina: fungicida (si es sobre hongos), viricida (virus), bactericida (bacteria).
• Bacteriostático: Agente que inhibe el crecimiento bacteriano sin destruir forzosamente las bacterias.
• Antiséptico: Sustancia que destruye los microorganismos o inhibe su multiplicación y que está indicada para ser aplicada sobre tejidos vivos.
• Desinfectante: Agente que destruye los microorganismos, pero no sus esporas, y que es de aplicación exclusiva sobre objetos inanimados.
• Limpieza: Proceso de eliminación de restos orgánicos e inorgánicos de una superficie. La suciedad interfiere en cualquier técnica de desinfección y esterilización, de ahí que la limpieza sea una condición previa e inexcusable a dichos procedimientos.
• Desinfección: Proceso de destrucción de microorganismos patógenos de una superficie inanimada, con excepción de las esporas y virus.
• Microorganismo: Microbio, ser vivo que solo puede observarse a través del microscopio.
• Detergente: Sustancia soluble en agua (hidrosoluble), efectiva para la limpieza de materiales y superficies.
• Patógeno: Microorganismo capaz de provocar una enfermedad infecciosa en la biología de un huésped.

Para desprender los restos de suciedad se utilizará una sustancia detergente, acompañada de acción mecánica (cepillado), y se realizará un enjuagado exhaustivo del material. Un secado minucioso favorece la conservación.

Factores que influyen en la eficacia de la desinfección

• Tipo de contaminación del material.
• Calidad de la limpieza previa.
• Concentración del desinfectante.
• Tiempo de contacto del material con el desinfectante.
• Configuración del objeto a desinfectar.

Desinfección y Esterilización de Instrumentos y Superficies

Desinfección Química

El empleo de productos químicos permite desinfectar a temperatura ambiente los instrumentos y superficies. El producto desinfectante debe tener un amplio espectro de actividad, una acción rápida e irreversible, la máxima estabilidad posible y no debe deteriorar los objetos ni tener un olor especialmente molesto.

Debe aplicarse de tal manera que se logre el mayor contacto con la superficie a desinfectar, evitándose el contacto directo con él, ya que por su propia función (destrucción de microorganismos), muchos desinfectantes tienen características de toxicidad importantes para el hombre. Por ello, deben adoptarse las medidas de protección y prevención adecuadas y seguir siempre las instrucciones para su aplicación, contenidas en la etiqueta y en la ficha de seguridad (que debe estar disponible). Si son de preparación propia, tener en cuenta lo dispuesto en los RR.DD. 1078/1993 y 363/1995.

Recomendaciones para el Uso de Desinfectantes

Qué hacer (SI)

• Preparar las soluciones correctamente.
• Utilizar recipientes limpios y secos para preparar las soluciones.
• Eliminar la suciedad, si es posible, antes de utilizar el desinfectante.
• Desechar la solución al finalizar el trabajo.
• Recordar que una solución desinfectante mal utilizada puede sostener el desarrollo de microorganismos y difundir una infección.

Qué no hacer (NO)

• Utilizar un desinfectante como un esterilizante.
• Almacenar instrumental o limpiarlo en desinfectante.
• Colocar demasiado material a la vez en la solución desinfectante.
• Utilizar soluciones antiguas.
• Mezclar desinfectantes sin conocer sus características.
• Añadir detergentes a los desinfectantes sin conocer sus características.

Esterilización

Con la esterilización se produce la destrucción de todos los gérmenes, incluidas esporas bacterianas, que pueda contener un material. Se debe recordar que, en ciertos casos, las piezas de los instrumentos son sometidas a la acción de soluciones detergentes o antisépticas para eliminar o diluir restos orgánicos. Dado que este paso no es una verdadera desinfección, si esta se considera necesaria, debe esterilizarse la pieza empleando alguno de los procedimientos que se listan a continuación:

• Esterilización por calor húmedo bajo presión (autoclave).
• Esterilización por calor seco y microondas.
• Radiaciones ionizantes.
• Radiaciones UV.
• Esterilización con líquidos y vapores químicos.
• Esterilización por óxido de etileno.
• Esterilización por plasma.

Tipos de Limpieza de Material de Laboratorio

La limpieza es el proceso mediante el cual se remueven los microorganismos y se retira la suciedad de los materiales.

Métodos de Limpieza

• Limpieza a mano por frotado: Se produce un arrastre de la suciedad con cepillo, agua y jabón. Se lava con agua del grifo y, cuando está enjuagado, se vuelve a enjuagar con agua destilada. El vidrio conviene limpiarlo rápidamente después de usarlo. Se debe secar en la estufa por 30 minutos.
• Limpieza a mano por inmersión: Se sumerge el material en una solución de limpieza durante 20-30 minutos (ej. con lejía, detergente). El material queda limpio sin tener que frotar. Se enjuaga con agua y luego con agua destilada. También se pueden usar baños de ultrasonido.
• Limpieza a máquina: Si es posible, es el método de elección. Algunos plásticos han de lavarse a mano porque no soportan las altas temperaturas.
• Limpieza analítica de trazas: Se usan ácidos y bases para la limpieza. Por ejemplo, para trazas de metal se introduce el material en ácido nítrico 1N durante 1 hora, después se enjuaga con agua destilada. Para trazas orgánicas se limpia con lejía, alcohol o cloroformo y luego se introduce en una solución de HCl 1N y se enjuaga con agua destilada.

Agua de Laboratorio y Purificación

En el laboratorio se emplea mucha agua y la del grifo no es adecuada porque contiene impurezas. Por eso hay que utilizar agua purificada, de la cual se han eliminado las impurezas disueltas o en suspensión. Puede ser de tres tipos:

Tipos de Agua Purificada

• Tipo 1: Para preparar patrones y controles.
• Tipo 2: Se usa en las técnicas cuantitativas, microbiología, hematología e inmunología.
• Tipo 3: Para obtener las de tipo 1 y 2, y para lavado de material.

Métodos para la Purificación del Agua

Destilación

Método clásico que se realiza en los destiladores. Se obtiene agua sin sustancias extrañas y de baja conductividad. A partir del agua destilada se puede obtener agua bidestilada, por una segunda destilación con un agente oxidante, como por ejemplo permanganato potásico, que destruye la materia orgánica que puede quedar de la primera destilación. Se puede obtener agua de tipo 1 o 2.

Inconvenientes de la Destilación:

• No elimina impurezas volátiles como el NH₃, Cl₂, CO₂.
• Se acumulan en el aparato las sustancias no volátiles, lo que implica limpiezas periódicas.

Desionización

Se hace pasar el agua por una columna con resinas de intercambio iónico que pueden ser ácidas o básicas. Son capaces de retener impurezas con carga positiva o negativa. Las resinas se regeneran tratándolas con ácidos o bases.

Inconvenientes de la Desionización:

• No elimina compuestos orgánicos ni microorganismos.
• Es conveniente una purificación preliminar para eliminar impurezas orgánicas y microorganismos. Tras el proceso hay que tratar con carbón activado o filtros.

Ósmosis Inversa

Se pasa bajo presión el agua por una membrana semipermeable que retiene gran parte de las partículas disueltas. Se obtiene agua de tipo 3 y se suele usar como método preliminar de purificación antes de pasar el agua por una columna de resinas de intercambio iónico.

Inconvenientes de la Ósmosis Inversa:

• Hay que combinarlo con otros métodos para conseguir mejor purificación.

Filtración

Se hace con membranas semipermeables. Permite eliminar partículas disueltas o en suspensión. La calidad depende del tamaño del poro: a mayor poro, peor calidad de filtración del agua.

Adsorción

Los agentes son el carbón vegetal activado, las arcillas, silicatos, etc. Sirve para eliminar impurezas orgánicas.

Procedimientos Detallados de Limpieza

Limpieza Manual

Es la que se realiza a mano y con guantes de la siguiente forma:

1. Lavar con agua sola o con detergente, ayudándonos de cepillos, escobillas o estropajos, ya que realizan una acción mecánica y facilitan el arrastre.
2. Aclarar varias veces con agua del grifo.
3. Al final, aclarar con agua destilada.
4. Por último, hay que secar dejando el material a escurrir o secar en una estufa de secado.

Limpieza Automática

Realizada en máquinas automáticas o lavadoras de ultrasonidos, añadiendo detergente. Se limpia más rápido que manualmente. Un buen detergente debe reunir una serie de cualidades como la de ser humectante (que facilite que el agua moje mejor la superficie de los materiales), no ser tóxico ni corrosivo, no dejar residuos, y que impida que, una vez retirada la suciedad, esta se adhiera de nuevo al material. Tras la limpieza, el material estará preparado para ser desinfectado o esterilizado.

Limpieza del Material de Vidrio

Hay que distinguir entre el material que está sucio y el que está muy sucio.

Limpieza de Material de Vidrio Sucio (Limpieza Estándar)

En el primer caso, no hay que descontaminarlo previamente. Hay que seguir estos pasos:

1. Lavar con agua y jabón con ayuda de esponjas y escobillas que no rayen.
2. Aclarar con abundante agua del grifo varias veces.
3. Enjuagar el material por arrastre con agua destilada o desionizada, realizando 3 enjuagues.

Para la limpieza se puede utilizar agua tibia o caliente, excepto con el material volumétrico, con el que no debe ser caliente, ya que el calor dilataría y dañaría el material. Tampoco debe usarse agua caliente si existen restos de sangre, porque esta se coagula con el calor y se adhiere al material de tal manera que luego es difícil de retirar. Para comprobar que el material está limpio, en el enjuague final con agua destilada no pueden quedar gotas adheridas, ya que si quedasen sería indicativo de que hay restos de suciedad.

Limpieza de Material de Vidrio Muy Sucio (Limpiadores Específicos)

Cuando se trata de material de vidrio muy sucio, además de agua y jabón, deben emplearse limpiadores más específicos o más enérgicos:

Jabones Específicos

Agentes tensoactivos en forma de polvo o disolución. Tienen la ventaja de no dejar residuos y no producir espuma. Para limpiar el material se sumerge durante varias horas en una disolución con este tipo de jabón y seguidamente se enjuaga con agua del grifo primero y los últimos aclarados con agua destilada. Son especialmente adecuados para la limpieza de material de vidrio en general.

Mezcla Sulfo-Crómica

Disolución de dicromato sódico o potásico en ácido sulfúrico muy concentrado. Esta mezcla es especialmente adecuada contra la suciedad persistente de origen orgánico y para el desengrasado del material de vidrio. La disolución se vierte en el recipiente a limpiar y puede actuar por inmersión desde 30 minutos hasta 24 horas. Es una disolución efectiva, pero se adhiere mucho a las superficies de vidrio y porcelana, por lo que es necesario realizar un enjuague muy exhaustivo del material después de su limpieza con mezcla crómica para separar las últimas trazas de dicromato que se hubieran adherido a las paredes del recipiente. Además, la mezcla crómica tiene el inconveniente de ser potencialmente tóxica y de que el ácido sulfúrico es corrosivo.

Ácidos

Corrosivos. Se utiliza el ácido nítrico fumante, mezcla del ácido clorhídrico con ácido nítrico al 50%, y también se utiliza una disolución de ácido nítrico al 10%. En este caso, el material se llena con esta disolución de ácido nítrico al 10% o se sumerge en ella durante el tiempo necesario, y a continuación se enjuaga varias veces (3 o 4) con agua destilada.

Potasa Alcohólica

Solución de hidróxido potásico al 20% en alcohol etílico, que se usa principalmente para eliminar residuos de grasas.

Secado del Material

Finalmente, para el secado del material se coloca en soporte. Si se necesita secado rápido, una vez limpio se introducirá en la estufa a unos 60-70ºC, teniendo en cuenta que nunca debe ponerse en ella el material volumétrico (pipetas, buretas ni matraces). Para acelerar el secado del material volumétrico podemos enjuagarlo con etanol o acetona o usando aire comprimido.

Limpieza de Pipetas

Un método consiste en introducirlas en agua durante un tiempo, aclararlas con agua del grifo y por último llenarlas con agua destilada hasta la tercera parte de su capacidad, e inclinándolas, agitar el agua hasta mojar todo el interior de la pipeta, operación que debe realizarse 3 o 4 veces.

Otro modo de limpiarlas es utilizando el pipetero, que consta de dos recipientes y un cestillo perforado donde se colocan las pipetas. Uno de los recipientes contiene la solución jabonosa y el otro sirve para aclarar, para lo cual contiene dos tubuladuras, una conectada a un grifo y la otra para que salga el agua de aclarado. Tras su uso, se sacan las pipetas y se enjuagan 3 veces con agua destilada. Finalmente, se deben colocar en posición invertida con la boquilla hacia abajo, en el portapipetas.

En todo caso, antes de utilizar la pipeta se debe realizar el curado de la misma, que consiste en llenar hasta la tercera parte con la solución o líquido que se vaya a medir, inclinarla y girarla para hacer pasar dicha solución o líquido por todo su interior, operación que debe efectuarse 3 veces. Así lo que se consigue es sustituir algún posible resto del agua destilada por la solución a medir y evitar interferencias del agua destilada.