Cuantificación de Glucosa en Plasma o Suero Sanguíneo (Método Enzimático)

La glucosa es el principal producto de la hidrólisis del almidón y glucógeno. Se absorbe a través de las paredes intestinales hacia la sangre y se transporta a los tejidos, incluyendo el músculo esquelético, cerebro, corazón e hígado. Todos los organismos obtienen energía de la degradación de la glucosa. Su homeostasis está regulada por los niveles hormonales de insulina y glucagón.

Normalmente, la glucosa no se excreta por vía urinaria. Pasa libremente al filtrado glomerular, donde alcanza la misma concentración que en la sangre, pero es reabsorbida completamente por el epitelio tubular. De esta manera, el riñón contrarresta la acumulación excesiva de glucosa. Cuando los niveles en sangre alcanzan entre 160 y 200 mg/dL, se produce la glucosuria. La glucosa se polimeriza a glucógeno en el hígado y los músculos, almacenándose en dichos órganos. Durante los períodos de hambre y ayuno, la reserva energética de polímeros se degrada a monómeros, que luego son captados por los diversos órganos para la obtención de energía.

Fundamento del Método Enzimático

El método se basa en la oxidación de la glucosa a ácido glucónico en presencia de oxígeno y la enzima glucosa oxidasa (GOD). El peróxido de hidrógeno (H2O2) formado en este proceso se descompone mediante la peroxidasa (POD). El oxígeno atómico liberado en esta reacción se combina con un cromógeno, que se colorea al oxidarse. La intensidad de la coloración generada es directamente proporcional a la cantidad de glucosa presente.

Reacciones Químicas

Glucosa + O2 + H2O --GOD (Glucosa Oxidasa)--> Ácido Glucónico + H2O2

2H2O2 + 4-AF + Fenol --POD (Peroxidasa)--> Quinona coloreada + 4H2O

Valores de Referencia de Glucosa

• Suero o plasma: 0.7 – 1.10 g/L (70 – 110 mg/dL)

Fórmula de Cálculo de Glucosa

Glucosa (g/L) = (Absorbancia Desconocida / Absorbancia Estándar) * 1.00 g/L

Nota: El valor de Absorbancia Estándar proporcionado es 0.653.

Principales Funciones de la Glucosa en el Organismo

• Es la fuente principal de energía para las células, especialmente el cerebro.
• Participa en la síntesis de ATP mediante la glucólisis y el ciclo de Krebs.
• Es necesaria para el almacenamiento de energía como glucógeno en hígado y músculos.
• Sirve como precursora de metabolitos necesarios para la síntesis de lípidos y aminoácidos.

Cuantificación del Colesterol Total

Las lipoproteínas son complejos macromoleculares que transportan lípidos en la sangre:

• VLDL (Lipoproteínas de Muy Baja Densidad): Transportan los triglicéridos desde el hígado hacia los tejidos.
• LDL (Lipoproteínas de Baja Densidad): Transportan el colesterol por la sangre (conocido como «colesterol malo»).
• HDL (Lipoproteínas de Alta Densidad): Recogen el exceso de colesterol de los tejidos y lo llevan hasta el hígado para su eliminación (conocido como «colesterol bueno»).

Los niveles de colesterol asociado a LDL correlacionan directamente con el riesgo cardiovascular, mientras que el colesterol asociado a HDL presenta una relación inversa.

¿Qué es el Colesterol?

Es un lípido policíclico no saponificable que se encuentra en todos los animales y plantas. Es sintetizado por el organismo y transportado por la sangre. Su función es participar en diversas actividades dentro del organismo; por ejemplo, forma parte de la estructura de las membranas celulares y es precursor de compuestos de carácter fisiológico, tales como las hormonas esteroides y la vitamina D.

Fundamento Enzimático del Colesterol

Ésteres de Colesterol --Lipasa--> Colesterol + Ácido Graso

Colesterol + O2 --CHOP (Colesterol Oxidasa)--> 4-Colesten-3-ona + H2O2

2 H2O2 + 4-AF + Fenol --POD (Peroxidasa)--> Quinona coloreada + 4 H2O

Fórmula de Cálculo de Colesterol Total

CT Colesterol (g/L) = D.O. Desconocida * Factor (Concentración Estándar / Absorbancia Estándar)

Valores de Referencia de Colesterol Total

• Normalmente: < 200 mg/dL

Características Importantes del Colesterol

• Estructura: Es un esteroide con un anillo de ciclopentanoperhidrofenantreno y un grupo hidroxilo (-OH) en el carbono 3, lo que le confiere carácter anfipático.
• Función Estructural: Es un componente clave de las membranas celulares, regulando su fluidez y estabilidad.
• Precursor Bioquímico: Da origen a hormonas esteroides (como cortisol y estrógenos), vitamina D y sales biliares.
• Transporte en Sangre: Se transporta en la sangre mediante lipoproteínas.

Fórmula de Cálculo de LDL-Colesterol

LDL-Colesterol (mg/dL) = Colesterol Total - HDL - (Triglicéridos / 5)

Cuantificación de Triglicéridos

Los triacilgliceroles (triglicéridos) se encuentran en forma de gotas oleosas en el citoplasma de las células animales y vegetales. En algunas células, casi todo el volumen está ocupado por una gota de grasa, cuya función es almacenar los depósitos de combustibles para el metabolismo. Los adipocitos, que son células animales especializadas, catalizan la liberación de ácidos grasos. Los triacilgliceroles también se encuentran debajo de las capas de la piel de los animales.

Fuentes Primarias de Triglicéridos para el Metabolismo Energético

• Triglicéridos de la dieta.
• Triacilgliceroles sintetizados en el hígado.
• Triacilgliceroles almacenados en los adipocitos (células grasas) como gotas de lípidos.

Fundamento Enzimático de los Triglicéridos

Triglicéridos + H2O --LPL (Lipoprotein Lipasa)--> Glicerol + Ácidos Grasos

Glicerol + ATP --GK (Glicerol Kinasa)--> Glicerol 3-Fosfato + ADP

Glicerol 3-Fosfato + O2 --GPO (Glicerol 3-Fosfato Oxidasa)--> Dihidroxiacetona Fosfato + H2O2

H2O2 + 4-Aminoantipirina + 4-Clorofenol --POD (Peroxidasa)--> Rojo de Quinona + 4H2O

Fórmulas de Cálculo de Triglicéridos

Triglicéridos (mg/dL) = (D.O. Muestra Desconocida / D.O. Estándar) * 200 mg/dL

Nota: El valor de D.O. Estándar proporcionado es 0.682.

Triglicéridos (mmol/L) = Triglicéridos (mg/dL) / 88.57

Valores de Referencia de Triglicéridos

• Normal: < 150 mg/dL o < 1.7 mmol/L
• Límite Alto: 150–199 mg/dL
• Alto: 200–499 mg/dL

Otros Métodos para la Determinación de Triglicéridos

• Método de Van Handel y Zilversmit.
• Cromatografía en Capa Fina (TLC).
• Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC).
• Resonancia Magnética Nuclear (RMN) y Espectrometría de Masas.

Principales Funciones de los Triglicéridos

• Reserva Energética: Son la principal forma de almacenamiento de energía en el cuerpo. Cada gramo de grasa aporta 9 kcal.
• Aislante Térmico: El tejido adiposo protege contra la pérdida de calor.
• Protección Mecánica: Amortiguan órganos vitales como los riñones.
• Transporte de Vitaminas Liposolubles: Facilitan el transporte de vitaminas como A, D, E y K.

Catalasa: Reacción de Fundamento

2 H2O2 → 2 H2O + O2