Variación de Impedancia (Principio Coulter)

La impedancia es la oposición que presenta un circuito eléctrico al paso de la corriente.

El Principio Coulter se basa en dos cámaras con una solución electrolítica separadas por un pequeño orificio, cada una con un electrodo. Al aplicar una diferencia de potencial, circula una corriente eléctrica gracias al movimiento de los iones cargados del electrolito.

Cuando la sangre total se diluye con un líquido conductor (diluyente electrolítico), se aplican diluciones específicas:

• Para hematíes (eritrocitos), dilución 1/50.000 en diluyente isotónico.
• Para leucocitos, dilución 1/500 en solución electrolítica de lisis para eliminar los hematíes.

El sistema utiliza un tubo con un orificio (de tamaño variable según el tipo celular) y dos electrodos, uno en la suspensión y otro dentro del tubo, que generan una corriente de baja intensidad a través del orificio.

Durante el recuento, una presión negativa (vacío) aspira un volumen definido de la suspensión celular a través del orificio. Cada célula que pasa genera un pulso, cuya intensidad refleja su tamaño, y el número de pulsos indica el número de células.

Además, algunos equipos miden también la conductividad de cada célula con una corriente de alta frecuencia, lo que aporta información adicional sobre la relación núcleo/citoplasma, la densidad nuclear y la complejidad del citoplasma (granulaciones).

Método de Dispersión Óptica

El método de dispersión óptica se basa en un capilar por el que circula una suspensión celular diluida, atravesada por un haz de luz. Cuando el haz de luz choca con una célula, la luz se dispersa y parte de esos rayos dispersos alcanzan el fotodetector.

Canales Especializados del Contador Hematológico

Canal de la Peroxidasa

Este canal permite contar los distintos tipos de leucocitos midiendo su tamaño celular y su actividad peroxidasa. La sangre diluida se trata con un reactivo que rompe los hematíes y produce una reacción citoquímica que revela la actividad peroxidasa, manifestada por una coloración gris oscura del citoplasma. Las células que se identifican son:

• Linfocitos: los más pequeños, sin actividad peroxidasa.
• Monocitos y basófilos: de mayor tamaño, con ligera actividad peroxidasa.
• Neutrófilos: grandes y muy cargados de peroxidasa.
• Eosinófilos: algo menores que los neutrófilos, pero también muy cargados de peroxidasa.
• LUC (Large Unstained Cells): grandes células no teñidas (linfocitos activados o células inmaduras), presentes en proporción igual o inferior al 4%.

Canal de los Basófilos

En este canal se rompen todas las células excepto los basófilos, que permanecen intactos y aparecen como las células de mayor tamaño. El resto de leucocitos se clasifican según la complejidad nuclear en:

• Mononucleares: linfocitos y monocitos.
• Polimorfonucleares: eosinófilos y neutrófilos.

De este canal se obtienen los siguientes parámetros del hemograma:

• Recuento de basófilos: se descuenta del valor de monocitos + basófilos obtenido en el canal de peroxidasa para calcular el recuento de monocitos.
• Índice de lobularidad: refleja la complejidad nuclear según la dispersión en ángulo alto.
• Alarma de desviación izquierda: aparece cuando las nubes de polimorfonucleares y mononucleares se solapan, indicando presencia de leucocitos inmaduros.
• Otras alarmas morfológicas: detección de blastos, linfocitos atípicos, eritroblastos, entre otros.

Canal de Eritrocitos y Plaquetas

El recuento de eritrocitos y plaquetas se realiza por variación de impedancia a partir de una dilución 1/50.000 de sangre total con un diluyente isotónico y conductor. Ambos recuentos se hacen en el mismo canal, con un orificio de unos 50 µm, y se distinguen por umbrales de intensidad de los pulsos eléctricos:

• Plaquetas: partículas menores de 20 fl.
• Eritrocitos: partículas mayores de 36 fl.

Normalmente se analizan 0,5 ml de sangre diluida, lo que representa unas 50.000 células por muestra. Las cámaras suelen tener tres orificios para realizar el recuento por triplicado, garantizando la exactitud y reproducibilidad. Si solo hay uno, se hacen varios recuentos consecutivos y se aceptan los resultados cuando al menos 2/3 están dentro de los límites.

A partir de los datos, el contador genera histogramas de distribución del tamaño para eritrocitos y plaquetas:

• Eje X: tamaño de las partículas (agrupadas por clases).
• Eje Y: número de partículas de cada tamaño.

Canal de Hemoglobina

La mayoría de los contadores disponen de un canal independiente para medir la hemoglobina, que funciona como un hemoglobinómetro automático. Mide la concentración de hemoglobina por colorimetría, siguiendo el método de la cianmetahemoglobina o variantes de este. Los valores pueden alterarse en casos de lipemia o ictericia, que interfieren con la medición óptica.

Expresión de los Resultados

A partir de las señales captadas por los distintos detectores, procesadas electrónicamente e interpretadas por el software del contador hematológico, se generan tres tipos de resultados: numéricos, gráficos y alarmas.

Resultados Numéricos

Representan la expresión cuantitativa de cada parámetro del hemograma.

• Medición directa: valores determinados en los distintos canales del contador.
• Cálculo indirecto: valores obtenidos por el software a partir de parámetros medidos.

Resultados Gráficos

Permiten visualizar la información de forma interpretativa. Existen tres tipos principales:

• Histogramas: muestran un único parámetro, relacionando el número de células con la intensidad del parámetro que expresan (por ejemplo, tamaño o volumen).
• Citogramas: representan dos parámetros simultáneamente, situando cada célula en un espacio bidimensional según la intensidad con que expresa ambos.
• Gráficos de flujo: ilustran el flujo de partículas a través de los canales durante la medición y permiten detectar alteraciones mecánicas o hidrodinámicas, como obstrucciones de orificios o capilares.

Alarmas

Indican posibles resultados anómalos que deben comprobarse o confirmarse mediante estudios complementarios. Pueden ser de dos tipos:

1. Alarmas Cualitativas

Basadas en la detección de alteraciones morfológicas que requieren verificación microscópica (manual o automatizada). Algunas alarmas comunes son:

• Leucocitos: Blastos, desviación izquierda, linfocitos atípicos, eosinofilia.
• Eritrocitos: Microcitosis, macrocitosis, anisocitosis, drepanocitosis, esferocitosis, aglutinación de eritrocitos.
• Plaquetas: Plaquetas grandes o aglutinación plaquetaria.

2. Alarmas Cuantitativas

Relacionadas con valores anormales en los recuentos celulares:

• Serie Roja: Anemia / Policitemia.
• Serie Blanca: Leucopenia / Leucocitosis.
• Plaquetas: Trombopenia / Trombocitosis.

Informes Generados

Los resultados se presentan en informes diferenciados para el operador y el clínico solicitante:

• Informe para el operador: Muestra toda la información (numérica, gráfica y alarmas) en la pantalla del monitor. El operador puede configurar la visualización y utilizar el informe para la validación interna.
• Informe para el clínico: Incluye solo los resultados numéricos validados, comparados con los valores de referencia.