Proceso Histológico

Obtención del Tejido

• Biopsia
• Órgano
• Animal completo

Fijación

Preservar las características morfológicas y moleculares del tejido, evitando procesos degradativos como la autolisis y la putrefacción.

Métodos de Fijación

• Físicos: Congelación, Calor
• Químicos: Inmersión, Perfusión

Fijadores Comunes

• Alcohol etílico
• Ácido Acético
• Glutaraldehído
• Formaldehído (formalina)

Inclusión

Endurecer la muestra para permitir su corte. Implica lavado y deshidratación (con xenol), aclarado con solventes orgánicos (xileno), y posterior inclusión en parafina o resina.

Corte

Se utilizan diversos instrumentos para obtener cortes finos:

• Microtomo para parafina: 5-20 µm
• Vibratomo: 30 – cientos de µm
• Microtomo de Congelación: 30-100 µm
• Criostato: 10-40 µm
• Ultra micrótomo: nanómetros
• Ultracriotomo: nanómetros

Tinción

Proceso para colorear componentes celulares y tisulares, facilitando su visualización. Se basa en la afinidad de los colorantes por diferentes estructuras.

• Colorantes Ácidos y Básicos: Se unen por enlaces electrostáticos.
• Acidofilia: Afinidad por colorantes ácidos.
• Basofilia: Afinidad por colorantes básicos.

Tinción General: Hematoxilina-Eosina (H-E)

• Hematoxilina: Colorante básico que tiñe estructuras ácidas como el núcleo (ADN, ARN) de color azul. También tiñe el RER.
• Eosina: Colorante ácido que tiñe estructuras básicas como el citoplasma, fibras colágenas, fibras elásticas y eritrocitos de color rosado/anaranjado/rojo.

Observación

Las muestras teñidas se observan mediante:

• Microscopio óptico
• Microscopio electrónico

Técnicas Avanzadas

Histoquímica

Proporciona información sobre la presencia y localización de macromoléculas. El Reactivo de PAS, por ejemplo, tiñe los carbohidratos de magenta.

Inmunohistoquímica

Utiliza anticuerpos marcados (a menudo con fluoresceína) para identificar antígenos específicos en el tejido. Ofrece gran especificidad y alta afinidad. Puede ser directa o indirecta. Es fundamental en el diagnóstico de enfermedades autoinmunes y oncológicas.

Histoquímica con Lectinas

Emplea proteínas (lectinas) que se unen a compuestos glúcidos, requiriendo un marcador para su visualización. Permite la localización de carbohidratos.

Radioautografía

Detecta la presencia de isótopos radiactivos incorporados en macromoléculas. Proporciona información directa sobre el sitio de síntesis de productos específicos dentro de la célula y es medible en el tiempo.

Artefactos

Estructuras observadas en el preparado histológico que no existen en el tejido vivo, apareciendo artificialmente durante el proceso de preparación. Ejemplos incluyen retracción, plegamiento, roturas del tejido y precipitados de colorante.

Tejido Conectivo

Generalidades

• Origen: Mesodérmico.
• Función: Proporciona soporte estructural y metabólico a otros tejidos y órganos.
• Composición: Matriz extracelular y células.
• Distribución: Se encuentra en todo el organismo.
• Características: Posee abundantes vasos sanguíneos, ofrece soporte físico y protección (mecánica e inmune), interviene en el intercambio metabólico tisular y varía en densidad y especialización según su función.

Matriz Extracelular

• Sustancia Fundamental: Compuesta por GAGs, proteoglucanos y glicoproteínas de adhesión.
• Fibras: Colágenas, reticulares y elásticas.

Clasificación del Tejido Conectivo

Tejido Conectivo Embrionario

• Mesenquimatoso
• Mucoso

Tejido Conectivo Propiamente Dicho

• Laxo (No Modelado)
• Denso:
  • Modelado (Tendinoso, Ligamentoso, Aponeurótico)
  • No Modelado (Laminar)

Tejido Conectivo Especializado

• Adiposo
• Cartílago
• Hueso
• Hematopoyético
• Linfático
• Sangre

Sustancia Fundamental

Material homogéneo sin estructura microscópica que confiere viscosidad y plasticidad al medio extracelular. Atrae agua (H₂O), permitiendo la difusión de macromoléculas y la defensa inmune.

• Composición: Proteoglucanos (GAGs y proteínas de adhesión) y ácido hialurónico.
• Glucosaminoglucanos (GAGs): Polisacáridos largos y flexibles, compuestos por repeticiones de disacáridos. Poseen carga negativa, atrayendo Na⁺ y H₂O, lo que facilita la difusión de macromoléculas hidrosolubles. Ejemplos: Condroitín sulfato, dermatán sulfato, heparán sulfato, heparina, queratán sulfato. El ácido hialurónico es un GAG largo y rígido, no sulfatado.

Proteoglucanos

GAGs unidos a un centro proteínico. Resisten la compresión, retrasan el movimiento de microorganismos y forman filtros moleculares. Ejemplo: Agrecán.

Proteínas de Adhesión

Permiten la unión entre células, fibras y proteoglucanos. Ejemplos: Fibronectina, integrina, talina, laminina.

Fibras del Tejido Conectivo

Proporcionan resistencia a la tensión y elasticidad, variando su cantidad y disposición según la función y necesidad estructural del tejido. La mayoría son producidas por los fibroblastos.

Tipos de Fibras

• Colágenas
• Reticulares
• Elásticas

Fibras Colágenas

• Son las más abundantes y fuertes.
• In vivo son blancas.
• Microscopía óptica: Acidófilas (se tiñen con eosina), onduladas, largas y no se ramifican.
• Microscopía electrónica: Agregados paralelos de fibrillas compuestas por moléculas de tropocolágeno.

Fibras Elásticas

• Conferen elasticidad al tejido conectivo.
• Son más delgadas, largas y ramificadas en el tejido conectivo laxo.
• Presentan poca tinción con H-E, pero se tiñen bien con orceína y aldehído fucsina.
• Compuestas por elastina, rica en glicina y prolina, y desmosina e isodesmosina, que otorgan elasticidad.

Fibras Reticulares

• Compuestas principalmente por colágeno tipo III (también tipo IV).
• Son más pequeñas y forman redes o mallas.
• Se asocian a hidratos de carbono (PAS+).
• Se encuentran en el límite epitelial, alrededor de vasos, tejido adiposo, y en tejidos hematopoyéticos y de sostén.